ABSTRACT
Antigenic preparations from Sporothrix schenckii usually involve materials from mixed cultures of yeast and mycelia presenting cross-reactions with other deep mycoses. We have standardized pure yeast phase with high viability of the cells suitable to obtain specific excretion-secretion products without somatic contaminations. These excretion-secretion products were highly immunogenic and did not produce noticeable cross-reactions in either double immunodiffusion or Western blot. The antigenic preparation consists mainly of proteins with molecular weights between 40 and 70 kDa, some of them with proteolytic activity in mild acidic conditions. We also observed cathepsin-like activity at two days of culture and chymotrypsin-like activity at four days of culture consistent with the change in concentration of different secreted proteins. The proteases were able to cleave different subclasses of human IgG suggesting a sequential production of antigens and molecules that could interact and interfere with the immune response of the host.
As preparações antigênicas de Sporothrix schenckii provêm geralmente de cultivos mistos de leveduras e micélios e apresentam reações cruzadas com outras micoses profundas. Foi padronizada a obtenção da fase leveduriforme pura, com alto índice de células viáveis, o que permite, por sua vez, obter produtos específicos da excreção-secreção sem contaminantes somáticos. Estes produtos da excreção-secreção são altamente imunogênicos, e não apresentam reações cruzadas visíveis em dupla difusão e sem Western blot. O preparado antigênico consiste principalmente em proteínas com peso molecular entre 40 e 70 kDa, sendo que algumas apresentam atividade proteolítica em meios levemente ácidos. Foi observada atividade do tipo catepsina em produtos da excreção-secreção obtidos a partir de leveduras de dois dias de cultivo, e atividade do tipo quimiotripsina aos quatro dias de cultivo, consistente com a mudança de concentração de proteínas secretadas. As proteases puderam clivar diferentes subclasses de IgG humanas, o que sugere uma produção seqüencial de antígenos e moléculas que podem interagir com a resposta imune do hospedeiro.
Subject(s)
Animals , Humans , Rabbits , Antigens, Fungal/biosynthesis , Cathepsins/biosynthesis , Chymotrypsin/biosynthesis , Fungal Proteins/biosynthesis , Immunoglobulin G/immunology , Sporothrix/metabolism , Antibodies, Antinuclear/immunology , Electrophoresis, Polyacrylamide Gel , Immunoblotting , Immunodiffusion , Molecular WeightABSTRACT
O presente trabalho teve como objetivo a produçäo de exoantígenos H e M das amostras 58, B-811 e O187 de Histoplasma capsulatum, utilizando o meio NGTA (neopeptona, glicose, tiamina e asparagina) em períodos de cultivo de 1, 2 e 3 meses, a 36-C, sob agitaçäo constante (50 v.p.m.). Os antígenos brutos foram avaliados contra anti-soro e antígeno de Histoplasma capsulatum de referência (Center for Disease Control), 4 soros de pacientes portadores de paracoccidioidomicose, 7 de histoplasmose e soro hiperimune anti-H. capsulatum produzido em coelhos, através da reaçäo de imunodifusäo dupla. Verificou-se que, com excesäo de B-679 com 1 mês de crescimento, todos os demais exoantígenos apresentaram as fraçöes H e M de precipitaçäo. Os exoantígenos obtidos de A-811 apresentaram só a banda H. Excetuando-se os exoantígenos 58 e B-679 com 1 mês de crescimento, todos os demais exoantígenos reagiram contra soros de pacientes com histoplasmose. Em relaçäo aos soros de pacientes com paracoccidioidomicose, somente os exoantígenos 58 e O187 näo apresentaram reaçäo cruzada. Todos os exoantígenos reagiram frente ao soro hiperimune de coelho anti-H. capsulatum. Para obtençäo de exoantígenos de H. capsulatum, sugerimos que as amostras sejam cultivadas sob as condiçöes anteriormente descritas, adotando-se o período de 3 meses de crescimento, utilizando-se exoantígenos de referência como controles da reaçäo